LabFD PspGI(EcorII) 快速內(nèi)切酶

貨號：F5560S

儲存條件：-20℃

同裂酶：EcoRII，MvaI，BstNI, BciT130I, BseBI, AjnI, Psp6I, Bst2UI

注： 同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡介

LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn)：5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應(yīng)體系；良好的酶活冗余度，輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。

建議反應(yīng)條件

1×LabFD™緩沖液；

37℃溫育；

參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

失活條件

80℃溫育 20 min。

功能活性檢測

最適反應(yīng)溫度下，在20ul反應(yīng)體系中，1ul LabFD™PspGI能夠在15min內(nèi)wanquan消化1ugλDNA(Dcm^-)。

超長時(shí)間溫育檢測

最適反應(yīng)溫度下，將1ul LabFD™  PspGI與1ugλDNA(Dcm^-)共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最適反應(yīng)溫度下，使用1ul LabFD™  PspGI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

非特異性內(nèi)切酶活性檢測

最適反應(yīng)溫度下，將1ul LabFD™  PspGI與1 μg超螺旋質(zhì)粒 DNA 共同溫育 4 h 后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于10%的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)變成缺刻或線性狀態(tài)。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. 本體系適用于經(jīng)過純化的 PCR 產(chǎn)物酶切。未純化的 PCR 產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度，DNA 聚合酶同時(shí)具有外切酶活性，會影響酶切產(chǎn)物，因此如下一步需進(jìn)行克隆 等操作，建議酶切前對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化。

2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；

3) 75℃溫育 15 min（質(zhì)粒），或 15~30 min（PCR 產(chǎn)物），或 30~60 min（基因組 DNA）；

4) 酚氯仿抽提或柱純化（可選）；

5) 如果使用 LabFD™ Color Buffer 進(jìn)行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可以直接進(jìn)行上樣電泳。

2.雙酶切或多酶切

1) 每種快速內(nèi)切酶的用量為1ul，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系；

2) 所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10；

3) 如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。

3.適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

注：如果總反應(yīng)體系大于20ul，應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自LABLEAD限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。